產品特點：

1. 超快免洗封閉——5min完成封閉，無需洗滌，直接孵育一抗；

2. 無蛋白成分——很好的避免因封閉液成分中的蛋白與抗體非特異性結合導致的非特異性條帶出現或者高背景；

3. 通用于常規抗體，磷酸化抗體，生物素標記抗體；

抗原抗體結合增強配方——可有效增加抗原抗體結合能力，更好的目的條帶信號，更低背景。

1. 將快速封閉液（10×）：去離子水按照1:9稀釋成1×快速封閉液工作液；

2. 將轉膜完成后的NC或者PVDF膜放入適宜體積的1×快速封閉液中（注意需完全覆蓋膜，對于 6.5*8.5cm 的整膜，推薦使用量 15-20ml），置于水平搖床上，室溫條件下振蕩孵育 5分鐘。

3. 千萬注意：使用的一抗抗體母液必須用1×快速封閉液稀釋成對應的抗體工作液（后續抗體工作液可直接在4度回收保存至少2個月），可更好的保證后續實驗結果的低背景，二抗可正常按照常規實驗方式稀釋即可。

備注：本步驟也可用HAKATA穩定型抗體稀釋（貨號：VK-Y100）來代替快速封閉液稀釋一抗后孵育，曝光效果更佳，還可顯著增加一抗工作液回收次數與保存時間，稀釋后的抗體工作液4度長期保存時間可延長至6-12個月。

· 取出封閉完成的膜，注意無需TBST洗滌，直接放入步驟2配置的一抗工作液正常孵育，完成后TBST重復洗滌3次，每次10min。

· 將步驟3中的孵育好一抗的膜加入步驟2配置的二抗工作液中孵育，孵育完成后TBST重復洗滌3次，每次10min，后續正常曝光。

保存條件：

4℃保存，保質期12個月。

注意事項：

1.該封閉液也可能存在一些不適用的實驗體系，因此對于一些特殊的實驗或抗體效果不能達到預期的，可以考慮用更適宜的封閉體系來進行實驗；

2.信號弱或者無信號：

（1）目的蛋白樣品上樣量過少或者抗體濃度過低，可加大上樣量或者增加一抗工作抗體濃度；

（2）轉膜效率過低導致膜上無目的蛋白或者目的蛋白過少，重新轉膜后用麗春紅染色檢驗轉膜效果正常后再進行后續封閉與一抗二抗孵育；

（3）抗體效價低，特異性差等原因造成，需要根據實驗情況進行調整。

3.背景高：

（1）未用快速封閉液稀釋一抗；

解決方案：用快速封閉液稀釋一抗或HAKATA穩定型抗體稀釋（貨號：VK-Y100）來稀釋一抗即可。

（2）抗體使用量過多或者蛋白上樣量過大會導致大量的非特異性條帶出現；

解決方案：降低蛋白上樣量或者抗體濃度即可避免。

（3）轉印膜的洗滌時間次數過少或者時間過短；

解決方案：補充TBST洗滌次數與洗滌膜的時間。

（4）試劑或儀器設備被污染等原因造成；

解決方案：需要根據實驗具體情況進行調整。

友情提醒：實驗時請穿戴實驗服并佩戴一次性手套操作。