貼壁細胞參考：

一. 收貨后消毒靜置待細胞全部穩(wěn)定后拍照。棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

二. T25瓶加入0.25％EDTA胰蛋白酶1-2ml于培養(yǎng)瓶中震蕩混勻，如果屬于貼壁不牢固的細胞很容易脫落的就培養(yǎng)箱外面消化震蕩等脫落90%以上終止消化，一般小于1分鐘以內，甚至不加胰酶有部分貼壁非常不牢固的細胞也會自然震蕩脫落。如果是貼壁牢固的細胞則置于37℃培養(yǎng)箱中消化提高效率，每40-50秒拿出培養(yǎng)箱震蕩幫助細胞脫落，如果脫落90%以上則對應3-6ml含有10%血清的完全培養(yǎng)基終止徹底，以防胰酶殘留。如果貼壁非常牢固的細胞，脫落的比例比較低，也不超過2分鐘后終止消化徹底，再加入1ml完全培養(yǎng)基讓細胞緩沖后再過2分鐘進行二次消化，反復分步消化以降低單次消化時長，減少刺激，保護細胞膜?；虿捎霉萎a刮細胞的方式處理也可以?？倸w原則是達到消化目的的同時減少細胞膜受到的損傷越小越好。

三.消化完成后輕輕吹勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培養(yǎng)皿中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。期間多的細胞一定保存多份細胞凍存管備種。

懸浮細胞參考：

大多數懸浮細胞對于環(huán)境比較敏感，建議一直維持高密度生長，一般情況下細胞密度維持在1×10 5到1×10 6個/mL（不同細胞對密度要求不同）。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中800-1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例（首次可以1:1分瓶）分到新T25瓶中，添加5-6ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:4的比例進行。大多數血液類相關的懸浮細胞受運輸影響比較大，會出現一批死細胞，如果因此密度降低了，可以離心后轉移至T25瓶中豎著培養(yǎng)，培養(yǎng)基添加5ml 以提高總體密度，隔一天后觀察密度可以的話再補液3ml完全培養(yǎng)基后T25瓶放倒，等沉淀穩(wěn)定后觀察細胞密度，持續(xù)添加培養(yǎng)基等密度上升足夠傳代為止。