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HCC-202,人乳腺原發(fā)性導(dǎo)管癌

產(chǎn)品貨號(hào)ALWS-1025
產(chǎn)品規(guī)格T25
目錄價(jià)格 3000.00
产品信息
特點(diǎn) 1640+10%FBS
特性
優(yōu)勢(shì)
產(chǎn)品詳情

細(xì)胞接收處理過(guò)程:

1、請(qǐng)顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí) 細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

2、收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,先打開(kāi)外包裝,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作,不開(kāi)瓶蓋放培養(yǎng) 箱靜置2-3小時(shí)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3、鏡下觀察:未超過(guò)80%匯合度時(shí),可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,重新加入6ml完全培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2培養(yǎng) 箱培養(yǎng);超過(guò)80%匯合度時(shí),根據(jù)情況傳代或者凍存。

4、懸浮細(xì)胞需離心收集處理。抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心3-5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照 說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。

(注意:若發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶,處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng),記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松,初次傳代最好使用T25培養(yǎng)瓶或6cm小皿1傳2)

貼壁細(xì)胞漂浮的處理方法:

注意:部分細(xì)胞由于貼壁松散,會(huì)出現(xiàn)運(yùn)輸后漂浮,冬天氣溫低時(shí)也會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞收縮漂浮,屬于不可避免 因素,正確處理后均可以正常生長(zhǎng)。

STEP1:將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管,離心收集細(xì)胞(1200rpm約250g-300g離心力,離心3-5min)去除舊培養(yǎng)基;

STEP2:用PBS重懸細(xì)胞,將所有細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中,再次離心(1200rpm約250g-300g離心力,離心3-5min)去除PBS;

STEP3:加入1ml左右胰酶EDTA溶液,0.25%重懸細(xì)胞,混勻即可,建議震動(dòng)離心管混勻,避免吹打細(xì) 胞,放入培養(yǎng)箱消化細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞特性決定消化時(shí)間(TM3、TM4、293 系列約1~2分鐘);

注意:部分細(xì)胞不能使用胰酶消化,請(qǐng)注意查看細(xì)胞說(shuō)明書(shū);單顆漂浮的細(xì)胞不需要胰酶處理。

STEP 4:消化好后,用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液,使細(xì)胞團(tuán)分散,迅速加入3-5ml含10%以上血清的培養(yǎng)基混勻終止消化,離心(1200rpm 3min)去除胰酶;

STEP5:加入5ml左右的細(xì)胞完全培養(yǎng)基混勻,按比例接入無(wú)菌培養(yǎng)瓶中;

STEP6:顯微鏡下觀察細(xì)胞是否成均勻分散的單顆細(xì)胞,若有3-5個(gè)成團(tuán)的小細(xì)胞團(tuán)可不用重新消化,使之貼壁后待細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定后再次傳代消散細(xì)胞。

懸浮細(xì)胞收集的處理方法:

注意:瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能繼續(xù)使用,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。培養(yǎng) 懸浮細(xì)胞建議用未經(jīng)TC處理的培養(yǎng)瓶。

STEP1:靜置4h后,請(qǐng)將瓶?jī)?nèi)所有細(xì)胞收集至6個(gè)15ml 的離心管110g(1000rpm)  離心3min, 將所有離心 后的細(xì)胞沉淀收集到一個(gè)T25 培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),平放10分鐘,鏡下觀察細(xì)胞密度,拍照記錄后放入培養(yǎng)箱中繼 續(xù)培養(yǎng),第二天密度達(dá)到80%即可傳代;

STEP2:懸浮細(xì)胞半換液處理:將培養(yǎng)瓶豎立在培養(yǎng)箱中靜置1小時(shí)左右,輕輕吸掉瓶?jī)?nèi)3ml 培養(yǎng) 基,然后補(bǔ)給3ml 的細(xì)胞完全培養(yǎng)基,傳代的時(shí)候可以直接補(bǔ)給5ml 細(xì)胞完全培養(yǎng)基,分兩個(gè)培養(yǎng)瓶 培養(yǎng),一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次,去掉死細(xì)胞;

STEP3:懸浮細(xì)胞傳代方法:觀察細(xì)胞無(wú)碎片無(wú)死細(xì)胞的情況下,建議直接加入新鮮的細(xì)胞完全培養(yǎng)基直 接分瓶即可。

售后服務(wù):

1.常溫細(xì)胞為 T25 培養(yǎng)瓶發(fā)貨,若收到細(xì)胞后狀態(tài)差,活率低,請(qǐng)當(dāng)天拍照記錄,發(fā)給技術(shù)支持或 者銷(xiāo)售人員;根據(jù)情況,不能調(diào)整或者調(diào)整培養(yǎng)一周后,狀態(tài)沒(méi)好轉(zhuǎn)的,可給予重發(fā)細(xì)胞。

2. 收到細(xì)胞24小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)細(xì)菌、真菌、霉菌污染給于免費(fèi)重發(fā)。4 8 小 時(shí)檢測(cè)支原體陽(yáng)性無(wú)條件重發(fā) 。(吸取上清至冰箱保存48小時(shí)之后檢測(cè)的不算準(zhǔn)確結(jié)果)收到細(xì)胞有污染現(xiàn)象,請(qǐng)于收貨當(dāng)天 及時(shí)拍照記錄,提供清晰的照片(照片為原培養(yǎng)瓶未拆封外觀照和顯微鏡下細(xì)胞狀態(tài)的照片);在培養(yǎng) 瓶未開(kāi)封的情況下,可給予重發(fā)細(xì)胞。

3.若收到細(xì)胞有漏液現(xiàn)象,請(qǐng)于收貨當(dāng)天及時(shí)拍照記錄(照片為原培養(yǎng)瓶未拆封外觀照和顯微鏡下細(xì) 胞狀態(tài)的照片);請(qǐng)保留原瓶培養(yǎng)基,并將原瓶培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到一個(gè)無(wú)菌的容器內(nèi)培養(yǎng),培養(yǎng)3天內(nèi)出現(xiàn) 細(xì)胞污染現(xiàn)象,可給予重發(fā)細(xì)胞。

4. 收到常溫細(xì)胞時(shí)狀態(tài)無(wú)異常,用戶自身操作導(dǎo)致細(xì)胞污染、細(xì)胞狀態(tài)不佳、細(xì)胞凍存后復(fù)蘇不活 的,不予免費(fèi)重發(fā)。

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),使用其他非細(xì)胞培養(yǎng)體系外源試劑處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,不予免費(fèi)重發(fā)。

6.非細(xì)胞出廠質(zhì)量問(wèn)題,客戶自身操作導(dǎo)致的細(xì)胞死亡,自收貨日起一個(gè)月內(nèi)可以申請(qǐng)低價(jià)二次購(gòu) 買(mǎi)折扣(原代細(xì)胞除外)。

7.細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)受多種因素影響,非細(xì)胞鑒定問(wèn)題,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不理想的,不予退/換細(xì)胞。

常溫細(xì)胞收貨注意事項(xiàng):

觀察是否有異常現(xiàn)象

收到貨后如發(fā)現(xiàn)有任何異常現(xiàn)象,如污染,漏液,細(xì)胞漂浮等,請(qǐng)拍照記錄,并及時(shí)聯(lián)系我們銷(xiāo)售 人員或者技術(shù)支持。

將培養(yǎng)瓶放置培養(yǎng)箱中靜止

75%酒精擦拭瓶身,封口膜可以不用撕去,將 T25 瓶置于培養(yǎng) 箱中靜置2~4h 后進(jìn)行操作,(注意:懸浮細(xì)胞請(qǐng)將培養(yǎng)瓶豎立

 

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