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hCMEC/D3細胞,人腦微血管內皮細胞永生化

產品貨號ALWS-218
產品規格T25
目錄價格 1700.00
产品信息
特點 ECM專用培養基;復蘇5-7天,凍存次日發貨
特性 貼壁生長,內皮細胞樣;hCMEC/D3細胞系來源于人顳葉微血管,該微血管是在癲癇控制手術期間從切除的組織中分離出來的,初級分離物富含腦內皮細胞(CECs)。在第一代中,細胞通過慢病毒載體轉導與人端粒酶催化亞基(hTERT)和SV40大T抗原連續永生化,隨后通過有限稀釋克隆選擇性分離CEC,并對克隆進行了廣泛的腦內皮表型表征。hCMEC/D3細胞代表了一種穩定、易于生長的血腦屏障(BBB),是藥物攝取和主動轉運研究的理想選擇,也是了解大腦內皮細胞對各種人類病原體和炎癥刺激的反應的理想選擇。
優勢 STR原始數據圖譜,支原體、真菌、細菌檢測報告 T25瓶80%密度提供發貨照片;≥1*106凍存管2支;二選一 1、提供代數靠前細胞 2、公司常年有不同買饋贈、促銷等活動形式 3、價格優勢 4、售后服務到位,專業技術一對一操作指導
產品詳情

細胞接收處理過程:

1、請顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時 細胞狀態的依據。

2、收到細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內,嚴格無菌操作,不開瓶蓋放培養 箱靜置2-3小時穩定細胞狀態。

3、鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的完全培養液收集至離心管中,重新加入6ml完全培養基,放入37℃、5%CO2培養 箱培養;超過80%匯合度時,根據情況傳代或者凍存。

4、懸浮細胞需離心收集處理。抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心3-5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照 說明書細胞培養條件新配制的完全培養基)。

(注意:若發貨的是密封培養瓶,處理完后放入培養箱培養,記得培養瓶蓋子擰松,初次傳代最好使用T25培養瓶或6cm小皿1傳2)

貼壁細胞漂浮的處理方法:

注意:部分細胞由于貼壁松散,會出現運輸后漂浮,冬天氣溫低時也會出現細胞收縮漂浮,屬于不可避免 因素,正確處理后均可以正常生長。

STEP1將培養瓶內所有培養基轉入無菌離心管,離心收集細胞(1200rpm約250g-300g離心力,離心3-5min)去除舊培養基;

STEP2:PBS重懸細胞,將所有細胞收集到一個離心管中,再次離心(1200rpm約250g-300g離心力,離心3-5min)去除PBS;

STEP3:加入1ml左右胰酶EDTA溶液,0.25%重懸細胞,混勻即可,建議震動離心管混勻,避免吹打細 胞,放入培養箱消化細胞,根據細胞特性決定消化時間(TM3、TM4、293 系列約1~2分鐘);

注意:部分細胞不能使用胰酶消化,請注意查看細胞說明書;單顆漂浮的細胞不需要胰酶處理。

STEP 4消化好后,用移液槍輕輕吹打細胞懸液,使細胞團分散,迅速加入3-5ml含10%以上血清的培養基混勻終止消化,離心(1200rpm 3min)去除胰酶;

STEP5:加入5ml左右的細胞完全培養基混勻,按比例接入無菌培養瓶中;

STEP6:顯微鏡下觀察細胞是否成均勻分散的單顆細胞,若有3-5個成團的小細胞團可不用重新消化,使之貼壁后待細胞生長穩定后再次傳代消散細胞。

懸浮細胞收集的處理方法:

注意:瓶中運輸培養基不能繼續使用,請換用按照說明書培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。培養 懸浮細胞建議用未經TC處理的培養瓶。

STEP1:靜置4h后,請將瓶內所有細胞收集至6個15ml 的離心管110g(1000rpm)  離心3min, 將所有離心 后的細胞沉淀收集到一個T25 培養瓶內,平放10分鐘,鏡下觀察細胞密度,拍照記錄后放入培養箱中繼 續培養,第二天密度達到80%即可傳代;

STEP2:懸浮細胞半換液處理:將培養瓶豎立在培養箱中靜置1小時左右,輕輕吸掉瓶內3ml 培養 基,然后補給3ml 的細胞完全培養基,傳代的時候可以直接補給5ml 細胞完全培養基,分兩個培養瓶 培養,一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次,去掉死細胞;

STEP3:懸浮細胞傳代方法:觀察細胞無碎片無死細胞的情況下,建議直接加入新鮮的細胞完全培養基直 接分瓶即可。

售后服務:

1.常溫細胞為 T25 培養瓶發貨,若收到細胞后狀態差,活率低,請當天拍照記錄,發給技術支持或 者銷售人員;根據情況,不能調整或者調整培養一周后,狀態沒好轉的,可給予重發細胞。

2. 收到細胞24小時內出現細菌、真菌、霉菌污染給于免費重發。4 8 小 時檢測支原體陽性無條件重發 。(吸取上清至冰箱保存48小時之后檢測的不算準確結果)收到細胞有污染現象,請于收貨當天 及時拍照記錄,提供清晰的照片(照片為原培養瓶未拆封外觀照和顯微鏡下細胞狀態的照片);在培養 瓶未開封的情況下,可給予重發細胞。

3.若收到細胞有漏液現象,請于收貨當天及時拍照記錄(照片為原培養瓶未拆封外觀照和顯微鏡下細 胞狀態的照片);請保留原瓶培養基,并將原瓶培養基轉移到一個無菌的容器內培養,培養3天內出現 細胞污染現象,可給予重發細胞。

4. 收到常溫細胞時狀態無異常,用戶自身操作導致細胞污染、細胞狀態不佳、細胞凍存后復蘇不活 的,不予免費重發。

5. 細胞培養時,使用其他非細胞培養體系外源試劑處理導致細胞出現問題,不予免費重發。

6.非細胞出廠質量問題,客戶自身操作導致的細胞死亡,自收貨日起一個月內可以申請低價二次購 買折扣(原代細胞除外)。

7.細胞相關實驗受多種因素影響,非細胞鑒定問題,實驗數據不理想的,不予退/換細胞。

常溫細胞收貨注意事項:

觀察是否有異常現象

收到貨后如發現有任何異常現象,如污染,漏液,細胞漂浮等,請拍照記錄,并及時聯系我們銷售 人員或者技術支持。

將培養瓶放置培養箱中靜止

75%酒精擦拭瓶身,封口膜可以不用撕去,將 T25 瓶置于培養 箱中靜置2~4h 后進行操作,(注意:懸浮細胞請將培養瓶豎立在 培養箱中靜置),在此期間,請查看說明書以確定細胞屬性。

觀察細胞密度是否超過80%

觀察細胞密度,若超過80%則可正常傳代處理(有些原代細胞不 可傳代,請仔細查閱細胞說明書并根據實際情況決定),首次傳代推 薦比例1:2。

注意:傳代比例指的是同等大小容器的前提下,如需更換培養容器,則需換算培 養容器貼壁面積,例如:一個T25 瓶的貼壁面積相當于1個6cm 的皿,1個10cm  的皿的貼壁面積相當于3個T25瓶,1個T75瓶的貼壁面積相當于3個T25 瓶。

觀察細胞密度,若細胞密度不到80%,建議吸出運輸培養基,加入5ml 細胞完全培養基,培養到可傳代密度。

 

特殊細胞收到注意事項

部分細胞由于貼壁不牢在運輸過程中發生細胞脫落,這是正常現象,正確處理后都可以正常生長。

1、將培養瓶內所有培養基轉入無菌離心管,離心收集細胞(1200rpm3-5min)去除舊培養基;

2、用PBS重懸細胞,將所有細胞收集到一個離心管中,再次離心(1200rpm3-5min)去除PBS;

3、加入1ml左右0.25%胰酶重懸細胞,混勻即可,不能吹打太多次,放入培養箱消化,根據細胞特性決定消化時間(約1~2分鐘);

4、消化好后,用移液槍輕輕吹打細胞懸液,使細胞團分散,迅速加入3-5ml完全培養基混勻以終止消化,離心(1200rpm3-5min) 去除胰酶;

5、加入5ml左右細胞相應的完全培養基混勻,按比例接入無菌培養瓶/皿中;

6、顯微鏡下觀察看細胞是否成均勻分散的單顆細胞,若有3-5個成團的小細胞團可不用重新消化,使之貼壁,待細胞生長穩定后再 消散細胞。

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