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Daudi細(xì)胞,人Burkkit淋巴瘤細(xì)胞

產(chǎn)品貨號ALWS-227
產(chǎn)品規(guī)格T25
目錄價格 1200.00
产品信息
特點(diǎn) RPMI1640培養(yǎng)基;10%胎牛血清;1%雙抗;復(fù)蘇5-7天,凍存次日發(fā)貨
特性 懸浮生長,淋巴母細(xì)胞樣;Daudi細(xì)胞是由E·Klein和G·Klein于1967年5月從一位16歲患有Burkitt's淋巴瘤的黑人男性患者建立的。Daudi細(xì)胞表面免疫球蛋白陽性(sIg+),Β2-微球蛋白陰性,EBNA陽性,并有衣殼抗原VCA。Daudi細(xì)胞攜帶EB病毒。Daudi細(xì)胞是典型的B淋巴母細(xì)胞,廣泛應(yīng)用于白血病發(fā)生機(jī)理的研究,也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。
優(yōu)勢 STR原始數(shù)據(jù)圖譜,支原體、真菌、細(xì)菌檢測報告 T25瓶80%密度提供發(fā)貨照片;≥1*106凍存管2支;二選一 1、提供代數(shù)靠前細(xì)胞 2、公司常年有不同買饋贈、促銷等活動形式 3、價格優(yōu)勢 4、售后服務(wù)到位,專業(yè)技術(shù)一對一操作指導(dǎo)
產(chǎn)品詳情

細(xì)胞接收處理過程:

1、請顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時 細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

2、收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,不開瓶蓋放培養(yǎng) 箱靜置2-3小時穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3、鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,重新加入6ml完全培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2培養(yǎng) 箱培養(yǎng);超過80%匯合度時,根據(jù)情況傳代或者凍存。

4、懸浮細(xì)胞需離心收集處理。抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心3-5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照 說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。

(注意:若發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶,處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng),記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松,初次傳代最好使用T25培養(yǎng)瓶或6cm小皿1傳2)

貼壁細(xì)胞漂浮的處理方法:

注意:部分細(xì)胞由于貼壁松散,會出現(xiàn)運(yùn)輸后漂浮,冬天氣溫低時也會出現(xiàn)細(xì)胞收縮漂浮,屬于不可避免 因素,正確處理后均可以正常生長。

STEP1將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管,離心收集細(xì)胞(1200rpm約250g-300g離心力,離心3-5min)去除舊培養(yǎng)基;

STEP2:PBS重懸細(xì)胞,將所有細(xì)胞收集到一個離心管中,再次離心(1200rpm約250g-300g離心力,離心3-5min)去除PBS;

STEP3:加入1ml左右胰酶EDTA溶液,0.25%重懸細(xì)胞,混勻即可,建議震動離心管混勻,避免吹打細(xì) 胞,放入培養(yǎng)箱消化細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞特性決定消化時間(TM3、TM4、293 系列約1~2分鐘);

注意:部分細(xì)胞不能使用胰酶消化,請注意查看細(xì)胞說明書;單顆漂浮的細(xì)胞不需要胰酶處理。

STEP 4消化好后,用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液,使細(xì)胞團(tuán)分散,迅速加入3-5ml含10%以上血清的培養(yǎng)基混勻終止消化,離心(1200rpm 3min)去除胰酶;

STEP5:加入5ml左右的細(xì)胞完全培養(yǎng)基混勻,按比例接入無菌培養(yǎng)瓶中;

STEP6:顯微鏡下觀察細(xì)胞是否成均勻分散的單顆細(xì)胞,若有3-5個成團(tuán)的小細(xì)胞團(tuán)可不用重新消化,使之貼壁后待細(xì)胞生長穩(wěn)定后再次傳代消散細(xì)胞。

懸浮細(xì)胞收集的處理方法:

注意:瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能繼續(xù)使用,請換用按照說明書培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。培養(yǎng) 懸浮細(xì)胞建議用未經(jīng)TC處理的培養(yǎng)瓶。

STEP1:靜置4h后,請將瓶內(nèi)所有細(xì)胞收集至6個15ml 的離心管110g(1000rpm)  離心3min, 將所有離心 后的細(xì)胞沉淀收集到一個T25 培養(yǎng)瓶內(nèi),平放10分鐘,鏡下觀察細(xì)胞密度,拍照記錄后放入培養(yǎng)箱中繼 續(xù)培養(yǎng),第二天密度達(dá)到80%即可傳代;

STEP2:懸浮細(xì)胞半換液處理:將培養(yǎng)瓶豎立在培養(yǎng)箱中靜置1小時左右,輕輕吸掉瓶內(nèi)3ml 培養(yǎng) 基,然后補(bǔ)給3ml 的細(xì)胞完全培養(yǎng)基,傳代的時候可以直接補(bǔ)給5ml 細(xì)胞完全培養(yǎng)基,分兩個培養(yǎng)瓶 培養(yǎng),一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次,去掉死細(xì)胞;

STEP3:懸浮細(xì)胞傳代方法:觀察細(xì)胞無碎片無死細(xì)胞的情況下,建議直接加入新鮮的細(xì)胞完全培養(yǎng)基直 接分瓶即可。

售后服務(wù):

1.常溫細(xì)胞為 T25 培養(yǎng)瓶發(fā)貨,若收到細(xì)胞后狀態(tài)差,活率低,請當(dāng)天拍照記錄,發(fā)給技術(shù)支持或 者銷售人員;根據(jù)情況,不能調(diào)整或者調(diào)整培養(yǎng)一周后,狀態(tài)沒好轉(zhuǎn)的,可給予重發(fā)細(xì)胞。

2. 收到細(xì)胞24小時內(nèi)出現(xiàn)細(xì)菌、真菌、霉菌污染給于免費(fèi)重發(fā)。4 8 小 時檢測支原體陽性無條件重發(fā) 。(吸取上清至冰箱保存48小時之后檢測的不算準(zhǔn)確結(jié)果)收到細(xì)胞有污染現(xiàn)象,請于收貨當(dāng)天 及時拍照記錄,提供清晰的照片(照片為原培養(yǎng)瓶未拆封外觀照和顯微鏡下細(xì)胞狀態(tài)的照片);在培養(yǎng) 瓶未開封的情況下,可給予重發(fā)細(xì)胞。

3.若收到細(xì)胞有漏液現(xiàn)象,請于收貨當(dāng)天及時拍照記錄(照片為原培養(yǎng)瓶未拆封外觀照和顯微鏡下細(xì) 胞狀態(tài)的照片);請保留原瓶培養(yǎng)基,并將原瓶培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到一個無菌的容器內(nèi)培養(yǎng),培養(yǎng)3天內(nèi)出現(xiàn) 細(xì)胞污染現(xiàn)象,可給予重發(fā)細(xì)胞。

4. 收到常溫細(xì)胞時狀態(tài)無異常,用戶自身操作導(dǎo)致細(xì)胞污染、細(xì)胞狀態(tài)不佳、細(xì)胞凍存后復(fù)蘇不活 的,不予免費(fèi)重發(fā)。

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時,使用其他非細(xì)胞培養(yǎng)體系外源試劑處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予免費(fèi)重發(fā)。

6.非細(xì)胞出廠質(zhì)量問題,客戶自身操作導(dǎo)致的細(xì)胞死亡,自收貨日起一個月內(nèi)可以申請低價二次購 買折扣(原代細(xì)胞除外)。

7.細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)受多種因素影響,非細(xì)胞鑒定問題,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不理想的,不予退/換細(xì)胞。

常溫細(xì)胞收貨注意事項(xiàng):

觀察是否有異?,F(xiàn)象

收到貨后如發(fā)現(xiàn)有任何異?,F(xiàn)象,如污染,漏液,細(xì)胞漂浮等,請拍照記錄,并及時聯(lián)系我們銷售 人員或者技術(shù)支持。

將培養(yǎng)瓶放置培養(yǎng)箱中靜止

75%酒精擦拭瓶身,封口膜可以不用撕去,將 T25 瓶置于培養(yǎng) 箱中靜置2~4h 后進(jìn)行操作,(注意:懸浮細(xì)胞請將培養(yǎng)瓶豎立在 培養(yǎng)箱中靜置),在此期間,請查看說明書以確定細(xì)胞屬性。

觀察細(xì)胞密度是否超過80%

觀察細(xì)胞密度,若超過80%則可正常傳代處理(有些原代細(xì)胞不 可傳代,請仔細(xì)查閱細(xì)胞說明書并根據(jù)實(shí)際情況決定),首次傳代推 薦比例1:2。

注意:傳代比例指的是同等大小容器的前提下,如需更換培養(yǎng)容器,則需換算培 養(yǎng)容器貼壁面積,例如:一個T25 瓶的貼壁面積相當(dāng)于1個6cm 的皿,1個10cm  的皿的貼壁面積相當(dāng)于3個T25瓶,1個T75瓶的貼壁面積相當(dāng)于3個T25 瓶。

觀察細(xì)胞密度,若細(xì)胞密度不到80%,建議吸出運(yùn)輸培養(yǎng)基,加入5ml 細(xì)胞完全培養(yǎng)基,培養(yǎng)到可傳代密度。

 

特殊細(xì)胞收到注意事項(xiàng)

部分細(xì)胞由于貼壁不牢在運(yùn)輸過程中發(fā)生細(xì)胞脫落,這是正?,F(xiàn)象,正確處理后都可以正常生長。

1、將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管,離心收集細(xì)胞(1200rpm3-5min)去除舊培養(yǎng)基;

2、用PBS重懸細(xì)胞,將所有細(xì)胞收集到一個離心管中,再次離心(1200rpm3-5min)去除PBS;

3、加入1ml左右0.25%胰酶重懸細(xì)胞,混勻即可,不能吹打太多次,放入培養(yǎng)箱消化,根據(jù)細(xì)胞特性決定消化時間(約1~2分鐘);

4、消化好后,用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液,使細(xì)胞團(tuán)分散,迅速加入3-5ml完全培養(yǎng)基混勻以終止消化,離心(1200rpm3-5min) 去除胰酶;

5、加入5ml左右細(xì)胞相應(yīng)的完全培養(yǎng)基混勻,按比例接入無菌培養(yǎng)瓶/皿中;

6、顯微鏡下觀察看細(xì)胞是否成均勻分散的單顆細(xì)胞,若有3-5個成團(tuán)的小細(xì)胞團(tuán)可不用重新消化,使之貼壁,待細(xì)胞生長穩(wěn)定后再 消散細(xì)胞。

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