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NB4細胞,人急性早幼粒細胞

產品貨號ALWS-378
產品規格T25
目錄價格 1200.00
产品信息
特點 RPMI1640培養基;10%胎牛血清;1%雙抗;復蘇5-7天,凍存次日發貨
特性 懸浮生長,圓形細胞;NB-4 細胞系來源1989 年第二次復發的急性早幼粒細胞白血病(APL;FAB 命名法中的 M3)患者的骨髓。
優勢 STR原始數據圖譜,支原體、真菌、細菌檢測報告 T25瓶80%密度提供發貨照片;≥1*106凍存管2支;二選一 1、提供代數靠前細胞 2、公司常年有不同買饋贈、促銷等活動形式 3、價格優勢 4、售后服務到位,專業技術一對一操作指導
產品詳情

細胞接收處理過程:

1、請顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時 細胞狀態的依據。

2、收到細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內,嚴格無菌操作,不開瓶蓋放培養 箱靜置2-3小時穩定細胞狀態。

3、鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的完全培養液收集至離心管中,重新加入6ml完全培養基,放入37℃、5%CO2培養 箱培養;超過80%匯合度時,根據情況傳代或者凍存。

4、懸浮細胞需離心收集處理。抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心3-5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照 說明書細胞培養條件新配制的完全培養基)。

(注意:若發貨的是密封培養瓶,處理完后放入培養箱培養,記得培養瓶蓋子擰松,初次傳代最好使用T25培養瓶或6cm小皿1傳2)

貼壁細胞漂浮的處理方法:

注意:部分細胞由于貼壁松散,會出現運輸后漂浮,冬天氣溫低時也會出現細胞收縮漂浮,屬于不可避免 因素,正確處理后均可以正常生長。

STEP1將培養瓶內所有培養基轉入無菌離心管,離心收集細胞(1200rpm約250g-300g離心力,離心3-5min)去除舊培養基;

STEP2:PBS重懸細胞,將所有細胞收集到一個離心管中,再次離心(1200rpm約250g-300g離心力,離心3-5min)去除PBS;

STEP3:加入1ml左右胰酶EDTA溶液,0.25%重懸細胞,混勻即可,建議震動離心管混勻,避免吹打細 胞,放入培養箱消化細胞,根據細胞特性決定消化時間(TM3、TM4、293 系列約1~2分鐘);

注意:部分細胞不能使用胰酶消化,請注意查看細胞說明書;單顆漂浮的細胞不需要胰酶處理。

STEP 4消化好后,用移液槍輕輕吹打細胞懸液,使細胞團分散,迅速加入3-5ml含10%以上血清的培養基混勻終止消化,離心(1200rpm 3min)去除胰酶;

STEP5:加入5ml左右的細胞完全培養基混勻,按比例接入無菌培養瓶中;

STEP6:顯微鏡下觀察細胞是否成均勻分散的單顆細胞,若有3-5個成團的小細胞團可不用重新消化,使之貼壁后待細胞生長穩定后再次傳代消散細胞。

懸浮細胞收集的處理方法:

注意:瓶中運輸培養基不能繼續使用,請換用按照說明書培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。培養 懸浮細胞建議用未經TC處理的培養瓶。

STEP1:靜置4h后,請將瓶內所有細胞收集至6個15ml 的離心管110g(1000rpm)  離心3min, 將所有離心 后的細胞沉淀收集到一個T25 培養瓶內,平放10分鐘,鏡下觀察細胞密度,拍照記錄后放入培養箱中繼 續培養,第二天密度達到80%即可傳代;

STEP2:懸浮細胞半換液處理:將培養瓶豎立在培養箱中靜置1小時左右,輕輕吸掉瓶內3ml 培養 基,然后補給3ml 的細胞完全培養基,傳代的時候可以直接補給5ml 細胞完全培養基,分兩個培養瓶 培養,一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次,去掉死細胞;

STEP3:懸浮細胞傳代方法:觀察細胞無碎片無死細胞的情況下,建議直接加入新鮮的細胞完全培養基直 接分瓶即可。

售后服務:

1.常溫細胞為 T25 培養瓶發貨,若收到細胞后狀態差,活率低,請當天拍照記錄,發給技術支持或 者銷售人員;根據情況,不能調整或者調整培養一周后,狀態沒好轉的,可給予重發細胞。

2. 收到細胞24小時內出現細菌、真菌、霉菌污染給于免費重發。4 8 小 時檢測支原體陽性無條件重發 。(吸取上清至冰箱保存48小時之后檢測的不算準確結果)收到細胞有污染現象,請于收貨當天 及時拍照記錄,提供清晰的照片(照片為原培養瓶未拆封外觀照和顯微鏡下細胞狀態的照片);在培養 瓶未開封的情況下,可給予重發細胞。

3.若收到細胞有漏液現象,請于收貨當天及時拍照記錄(照片為原培養瓶未拆封外觀照和顯微鏡下細 胞狀態的照片);請保留原瓶培養基,并將原瓶培養基轉移到一個無菌的容器內培養,培養3天內出現 細胞污染現象,可給予重發細胞。

4. 收到常溫細胞時狀態無異常,用戶自身操作導致細胞污染、細胞狀態不佳、細胞凍存后復蘇不活 的,不予免費重發。

5. 細胞培養時,使用其他非細胞培養體系外源試劑處理導致細胞出現問題,不予免費重發。

6.非細胞出廠質量問題,客戶自身操作導致的細胞死亡,自收貨日起一個月內可以申請低價二次購 買折扣(原代細胞除外)。

7.細胞相關實驗受多種因素影響,非細胞鑒定問題,實驗數據不理想的,不予退/換細胞。

常溫細胞收貨注意事項:

觀察是否有異常現象

收到貨后如發現有任何異常現象,如污染,漏液,細胞漂浮等,請拍照記錄,并及時聯系我們銷售 人員或者技術支持。

將培養瓶放置培養箱中靜止

75%酒精擦拭瓶身,封口膜可以不用撕去,將 T25 瓶置于培養 箱中靜置2~4h 后進行操作,(注意:懸浮細胞請將培養瓶豎立在 培養箱中靜置),在此期間,請查看說明書以確定細胞屬性。

觀察細胞密度是否超過80%

觀察細胞密度,若超過80%則可正常傳代處理(有些原代細胞不 可傳代,請仔細查閱細胞說明書并根據實際情況決定),首次傳代推 薦比例1:2。

注意:傳代比例指的是同等大小容器的前提下,如需更換培養容器,則需換算培 養容器貼壁面積,例如:一個T25 瓶的貼壁面積相當于1個6cm 的皿,1個10cm  的皿的貼壁面積相當于3個T25瓶,1個T75瓶的貼壁面積相當于3個T25 瓶。

觀察細胞密度,若細胞密度不到80%,建議吸出運輸培養基,加入5ml 細胞完全培養基,培養到可傳代密度。

 

特殊細胞收到注意事項

部分細胞由于貼壁不牢在運輸過程中發生細胞脫落,這是正常現象,正確處理后都可以正常生長。

1、將培養瓶內所有培養基轉入無菌離心管,離心收集細胞(1200rpm3-5min)去除舊培養基;

2、用PBS重懸細胞,將所有細胞收集到一個離心管中,再次離心(1200rpm3-5min)去除PBS;

3、加入1ml左右0.25%胰酶重懸細胞,混勻即可,不能吹打太多次,放入培養箱消化,根據細胞特性決定消化時間(約1~2分鐘);

4、消化好后,用移液槍輕輕吹打細胞懸液,使細胞團分散,迅速加入3-5ml完全培養基混勻以終止消化,離心(1200rpm3-5min) 去除胰酶;

5、加入5ml左右細胞相應的完全培養基混勻,按比例接入無菌培養瓶/皿中;

6、顯微鏡下觀察看細胞是否成均勻分散的單顆細胞,若有3-5個成團的小細胞團可不用重新消化,使之貼壁,待細胞生長穩定后再 消散細胞。

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